Забор гистологического материала при вскрытии

Обновлено: 04.05.2024

Гистологическое исследование, по сути, является методом диагностики заболевания на тканевом уровне — исследование врачом-патологоанатомом под микроскопом специально подготовленного участка патологической ткани позволяет получить представление о сути и выраженности патологического процесса, выявить его особенности и благодаря этому точно поставить диагноз и подобрать требуемое лечение. В онкологии гистологическое исследование играет роль «третейского судьи» — только заключение патологоанатома о наличии патологических клеток даёт право клиницисту поставить диагноз «рак». Гистологическое исследование широко применяется практически во всех медицинских специальностях и всегда выполняется после любой операции, но именно в онкологии оно имеет особое значение.

Как получают материал для гистологического исследования?

Процесс получения фрагмента ткани для гистологического исследования называется биопсия. Выделяют следующие виды биопсии:

Кор-биопсия. Выполняется специальной иглой и автоматическим биопсийным пистолетом.
Аспирационная биопсия. Применяется для забора жидкостного содержимого образований, например, кист или плевральной полости.
Тонкоигольная аспирационная биопсия. Подвид аспирационной биопсии, материал забирается с помощью шприца и специальной иглы с заостренным или фестончатым краем. При таком методе возможно получить для исследования не только жидкостное содержимое, но и кусочек ткани.
Аспирационно-режущая биопсия. При этом методе одной иглой берутся и фрагменты ткани, и клеточный материал для исследования.
Трепанбиопсия. Забор производится трепаном — инструментом, представляющим собой полую трубку с заострённым концом. Применяется для взятия биопсии из костной ткани.
Эксцизионная биопсия. Подразумевает удаление всего патологического образования (например, опухолевого узла) целиком. Наглядным примером эксцизионной биопсии является удаление увеличенного лимфатического узла при подозрении на лимфому.
Скарификационная биопсия. Забор выполняется путём срезания тонкого пласта ткани, широко применяется для исследования новообразований кожи.
Щипковая биопсия. Выполняется специальными биопсийными щипцами, часто применяется при заболеваниях желудочно-кишечного тракта.
Браш-биопсия. Материал для исследования забирается с помощью специальной щёточки путём его соскабливания — например, со стенки бронха.
Петлевая биопсия. Забор гистологического материала производится петлей одновременно с работой коагулятора. Применяется в отоларингологии, гинекологии.
Отпечаток. Применяется при необходимости исследования отделяемого из эрозии или язвы — предметное стекло прикладывается к изъязвленной поверхности.
Мазок-отпечаток. Материал для исследования снимается скальпелем, шпателем или специальной щёточкой и переносится на предметное стекло.

Как выполняется биопсия?

Биопсия проводится обычно под местной анестезией, в случае, если образование располагается достаточно глубоко — под контролем УЗИ или рентгена. От пациента не требуется какой-либо специфической подготовки (кроме, пожалуй, психологического настроя). Время процедуры не ограничено — если выполняется скарификационная биопсия или мазок-отпечаток, то требуется буквально несколько минут, а если речь идёт о биопсии глубоко расположенного образования, особенно вблизи крупных сосудов или нервов, то времени требуется значительно дольше.

В процессе выполнения биопсии иглу проводят к образованию и, в зависимости от выбранного метода, либо выполняют аспирацию одновременно с продвижением иглы к центру образования (если проводится аспирационная биопсия), либо вводят иглу в образование и фиксируют внутри неё столбик ткани (если проводится кор-биопсия).

Процесс получения ткани с помощью биопсийной игры на сегодняшний день является либо полуавтоматическим, либо автоматическим. При полуавтоматическом процессе продвижение желобка с иглой в патологический очаг производится вручную, а активизация канюли в игле, которая и захватывает ткань, происходит автоматически с помощью подпружиненного спускового механизма. В автоматическом варианте используется специальный биопсийный пистолет, и врачу требуется только поднести его к интересующей области.

Также возможно провести биопсию во время выполнения диагностического эндоскопического исследования, например, ЭГДС или бронхоскопии. В этом случае забор гистологического материала происходит практически безболезненно для пациента, хоть и причиняет определённый дискомфорт.

Кроме того, на гистологическое исследование будут направлены ткани, удалённые во время операции. Следует отметить, что в отдельных случаях операция может быть назначена как раз для получения гистологического материала (например, назначение раздельного диагностического выскабливания матки и цервикального канала с целью установить причину гинекологического заболевания).

Виды гистологического исследования

В первую очередь проводится собственно гистологическое исследование, то есть изучение специально подготовленной ткани, взятой при биопсии, под микроскопом. Процесс подготовки ткани для исследования включает несколько этапов.

Кусочек ткани обезвоживают и пропитывают парафином, тем самым формируя небольшой кубик, в который и заключена ткань.
Далее с парафинового кубика выполняют срезы микротомом, причём толщина срезов может достигать 3 микрометров.
Срезы переносятся на стекло, подготавливаются к окрашиванию и окрашиваются одним из известных методов с целью облегчения определения и дифференцировки отдельных структур ткани при проведении исследования.

Таким образом, процесс подготовки ткани к гистологическому исследованию достаточно длительный, чем и объясняется получение заключения врача через несколько дней после биопсии. Однако в случае, когда требуется срочное исследование (например, оценка краёв резекции в ходе операции или же исследование сторожевого лимфоузла при раке молочной железы), процесс подготовки ткани может быть сокращён до получаса, однако в этом случае качество полученного гистологического препарата существенно ниже, поэтому после операции проводится тщательное изучение биоматериала в плановом порядке.

Описание процесса подготовки ткани к гистологическому исследованию неслучайно описано столь подробно, поскольку нередки ситуации, когда пациент хочет получить второе мнение или же продолжить лечение в другом учреждении. В этой ситуации целесообразно взять и готовые гистологические препараты («стёкла»), и, по возможности, парафиновые блоки, так как проводящий исследование патологоанатом может при необходимости дорезать несколько срезов с блока, применить иной вид гистологических красителей и провести дополнительные исследования на большем количестве биопсийного материала.

Какие исследования могут дополнять изучение срезов под микроскопом? В первую очередь это иммуногистохимическое исследование, позволяющее определить гистологическую принадлежность опухоли, что крайне важно, например, при исследовании метастаза из невыявленного первичного очага. В этом случае оценивается экспрессия различных генов и их белков в ткани. Также при раке молочной железы иммуногистохимическое исследование позволяет определить, есть ли у опухоли рецепторы к эстрогену и прогестерону, и, соответственно, назначить требуемое при выявленном молекулярном подтипе химиотерапевтическое лечение и гормонотерапию. Наконец, определение экспрессии белка Her2/neu позволяет заключить, показана ли больному раком молочной железы или раком желудка таргетная терапия.

Отдельно хотелось бы остановиться на цитологическом исследовании. В отличие от гистологического исследования, при котором предметом изучения являются ткани, при цитологическом анализе изучаются отдельные клетки на предмет патологических отклонений. Цитологическое исследование обладает меньшей точностью, нежели гистологическое, но позволяет дать заключение о природе заболевания в тех случаях, когда невозможно получить кусочек ткани (например, при анализе плеврального выпота — является ли он связанным с опухолевым поражением плевры или нет — или смывов с брюшины в случае подозрения на метастатические отсевы рака яичников).

Показания для проведения гистологического исследования

Гистологическое исследование — наиболее точный метод диагностики, к которому следует прибегать, когда все другие исследования в совокупности не могут однозначно указать на конкретный диагноз.

В первую очередь выполнение гистологического исследования показано пациентам с подозрением на злокачественное новообразование или с уже подтвержденным диагнозом «рак». В первом случае результат исследования даёт право врачу окончательно поставить диагноз. Во втором случае выполнение гистологического исследования показано, чтобы:

отслеживать динамику, например, подтвердить отдаленное метастазирование;
менять тактику лечения сообразно результатам, например, если больной раком молочной железы химиотерапия проводилась до операции, а результаты послеоперационного гистологического исследования не показали полного ответа опухолевых клеток на лечение, в отдельных случаях возможно назначить таблетированную химиотерапию в послеоперационном периоде.

Далее, гистологическое исследование показано в случае заболеваний, которые по своей сути являются доброкачественными, но обладают потенциалом к озлокачествлению. Таковыми являются, например, полипы кишечника; сами по себе они не несут угрозы для жизни, но потенциально могут переродиться в опухоль, поэтому полипы после удаления обязательно подлежат исследованию с целью определить, не появились ли в них опухолевые структуры.

Широкое применение гистологического исследования наблюдается и при неопухолевых заболеваниях. В гастроэнтерологии и гинекологии исследование тканей и клеток, помимо исключения опухолевого процесса, также предназначено для оценки воспалительных процессов и их динамики, выявления эндокринных нарушений. Большую роль гистологическое исследование имеет и при лечении аутоиммунных заболеваний, позволяя оценить степень активности патологического процесса и тяжесть поражения, а также ответ на проводимую терапию.

Наконец, гистологическое исследование, а, вернее, его подвид — цитологическое исследование — нашло своё место и в скрининге. Исследование мазка-отпечатка с шейки матки позволяет определить предраковое состояние или уже развивающуюся опухоль, и простота и эффективность данного метода позволила включить мазок в скрининг на рак шейки матки.

Следует отметить, что противопоказаний как таковых к проведению гистологического исследования нет, так как забор гистологического материала является малоинвазивной и хорошо переносимой процедурой. Возможные осложнения могут быть связаны с индивидуальной реакцией пациента на анестетики или же с нарушением свёртываемости крови. В любом случае пациенту назначается покой и холод на место проведения биопсии, анальгетики при болях.

Результат гистологического исследования

Результат гистологического исследования будет готов спустя несколько дней после выполнения биопсии, что связано с этапной подготовкой исследуемой ткани и изучением биоматериала врачом-патологоанатомом под микроскопом. Результатом может быть как короткое заключение с указанием установленного тканевого строения патологического образования (например, «инвазивный дольковый рак»), так и подробное описание всех изменений в строении ткани и составляющих её клеток.

Расшифровкой результатов гистологии должен заниматься лечащий врач, так как гистологическое исследование назначается именно им и с совершенно определенной целью. Полученное заключение по цитологическому или гистологическому исследованию поможет врачу в установке клинического диагноза и в подборе требуемых на данный момент методов лечения.

Гистологическое исследование является одним из методов диагностики злокачественных новообразований и ряда доброкачественных заболеваний. Врачи «Евроонко» обладают высочайшей квалификацией для интерпретации результатов исследования и назначения требуемого лечения.

Гистологическое исследование представляет собой изучение на микроскопическом уровне объектов, то есть тканей, взятых от трупа или операционного материала. Специалист должен определить то, что до него не увидел судебно-медицинский эксперт, а также уточнить те моменты, которые вызывают у него сомнения. Конечная цель проводимого исследования заключается в установлении возможной причины смерти человека, определении срока полученных им повреждений, выявлении возможных хронических заболеваний и еще ряда параметров. Очень часто возникает спор между тем учитывать или нет данные гистологического исследования. Часть экспертов считает, что это исследование лишь лабораторное (дополнительное) и принимать его во внимание или нет при проведении экспертизы трупа это личное дело каждого. По общероссийским статистическим данным судебно-гистологическое исследование назначается в 60,6% случаев судебно-медицинского исследования и экспертизы трупа.

При исследовании трупа важнейшим из возникающих вопросов является определение давности образования и прижизненности повреждений. При его решении имеют огромное значение макроскопические признаки, но не менее важное место отводится су-дебно-гистологическим данным. Для наилучшего получения результатов о более точном времени возникновения повреждения, микропрепараты следует изымать на границе поврежденных и неповрежденных тканей. Убедительными признаками прижизненности повреждений, которые устанавливаются только специальными методами гистологических исследований, являются: паренхим-ноклеточная эмболия - перенос кровью клеток, кусочков тканей поврежденных органов, мышц, костных осколков, жира; воздушная эмболия - возникает при повреждении крупных сосудов, через которые воздух проникает в правые сердечные камеры (желудочек и предсердие), в результате чего наступает паралич сердца; отек, который возникает в месте травмы и часто носит студневидный характер. Для определения давности образования повреждений, после нанесения которых смерть наступила более чем через 30-40 минут, характерно наличие отчетливых начальных признаков воспалительной реакции, которые макроскопически могут быть не видны; чем больше времени прошло после нанесения повреждения до смерти, тем выражен-нее признаки прижизненности повреждений.

Признаки прижизненности повреждений, устанавливаемые гистологическим исследованием: кровоизлияния в месте повреждения, характеризующие массивностью и компактностью скопления эритроцитов, в то же самое время со значительным рассеиванием их в окружности очага повреждения, эритроциты в этих случаях нередко обнаруживаются вдали от поврежденных сосудов; множественные кровоизлияния в пространства вокруг сосудов мозга при травме головы; острый отек; жировая и воздушная эмболия; признаки воспалительных реакции.

В случае с мумифицированным образцом очень часто положительный результат невелик, так как большую роль в данном случае имеет среда, в которой находилось тело. Но встречаются исключительные варианты частичной мумификации трупа и гистологический метод исследования является единственным способом установить прижизненность и давность повреждений, так как микроскопически еще можно увидеть кровоизлияния и признаки воспаления. Значимыми при исследовании и экспертизе расчлененных трупов являются гистологические данные. Не так часто, но появляются в практике эксперта трупы с макроскопически спорными данными о прижизненности странгуляциои-ной борозды, особенно если их имеется несколько, значимую роль в подтверждении играют гистологические и химические данные. При установлении жизнеспособности, живо и мертворожденности особенно важной проблемой является определение аэрирован-ности (воздушности) легочной ткани, степени зрелости плода, что только секционной картиной не может быть подтверждено. Гистологическое исследование позволяет решать вопросы диагностики холодовой травмы даже при минимально выраженных макроскопических признаках, в органах и тканях прослеживаются характерные морфологические морфофункциональные изменения в сосудах всех уровней.

Конечно, имеются некоторые минусы при оценке данных гистологических исследований, в виду различных факторов влияющих на формирование патологических процессов, таких как температура и влажность внешней среды, различные сопутствующие заболевания и иммунодефицитные состояния организма, алкогольная интоксикация, возраст и т.д. Эта проблема на данном этапе развития медицины не достаточно освещена и каких-либо точных рекомендаций и методических указаний не создано.

В последние годы наблюдается неуклонный рост случаев ненасильственной смерти в судебно-медицинской практике и на настоящий момент она преобладает над насильственной.

При анализе всех случаев скоропостижной смерти по данным ГУЗ Бюро СМЭ Камчатской области за период с 2002 по 2006 года лидирующее положение занимает смерть от сердечно-сосудистой патологии. Особенно значимой эта проблема является при смерти молодого, трудоспособного слоя населения. Учитывая географическое положение Камчатской области, значимый процент трудоспособного населения занят в рыбодобывающей и рыбообрабатывающей промышленности. Нередко встречаются случаи скоропостижной смерти от острой коронарной недостаточности на суднах, не смотря на то, что перед выходом в море весь плавсостав в обязательном порядке проходит медицинское обследование. По статистическим данным первое место среди смерти от патологии сердечно-сосудистой системы занимают атеросклеротические изменения сосудов сердца и гипертоническая болезнь. Если проявления этих заболеваний достаточно хорошо видны макроскопически, то проявления острой коронарной недостаточности, кроме признаков быстрой смерти - неравномерного кровенаполнения миокарда, точеных кровоизлияний под наружную оболочку сердца и плевру легких, жидкого состояния крови и полнокровия внутренних органов при секции трупа не выявляются. Острая коронарная недостаточность - нарушение способности сердца обеспечивать кровоснабжение органов и тканей в соответствии с их метаболическими потребностями. Диагностировать смерть от острой коронарной недостаточности можно только при использовании данных гистологического исследования, так как какие-либо морфологические признаки чаще можно увидеть в сосудистом русле микроскопически - «подушкообразное» выбухание эндотелия сосудов, спазм сосудов мелкого калибра и дистония с явлениями застойного полнокровия крупного, резко выраженное неравномерное кровенаполнение микроцир-куляторного русла.

По данным ГУЗ Бюро СМЭ Камчатской области за период 2002-2006 года смерть в результате острой коронарной недостаточности от общего количества сердечнососудистой патологии составила: 2002 -3,8%; 2003 - 5,0%; 2004 - 4,0%: 2005 - 4,5%; 2006 - 5,3%. Проводя сравнительный анализ по половому признаку, усматривается относительное постоянство количества умерших мужчин и женщин за анализируемые годы и обращает на себя внимание явное преобладание лиц мужского пола (76%) по сравнению с женским (24%).
Не менее остро стоит вопрос и об «омоложении» острой коронарной недостаточности. Так за пять лет в Камчатской области выявлена следующая тенденция возрастного показателя смертности от данной патологии:

Таблица 1

Возрастной показатель смертности мужчин от острой коронарной недостаточности за 2002 - 2006 гг. включительно.

Года/возраст	До 20 лет	21-30 лет	31-40 лет	41-50 лет	51-60 лет	> 60 лет
2002	-	18,5%	36%	36%	9,5%	-
2003	7,2%	21,5%	35,6%	21,5%	14,3%	-
2004	14,3%	21,4%	21,4%	28,7%	14,2%	-
2005	-	15,4%	46,1%	23,1%	7,7%	7,7%
2006	-	25,0%	41,6%	25,0%	-	8,4%

Таблица 2

Возрастной показатель смертности женщин от острой коронарной недостаточности за 2002 -
2006гг. включительно.

Года/возраст	До 20 лет	21-30 лет	31-40 лет	41-50 лет	51-60 лет	> 60 лет
2002	-	-	66,6%	33,3%	-	-
2003	-	33,3%	33,3%	33,3%	-	-
2004	-	50,0%	50,0%	-	-	-
2005	16,7%	33,4%	16,7%	16,7%	16,7%	-
2006	16,7%	33,4%	33,4%	16,7%	-	-

Из данных таблиц видно, что больший процент смертности приходится на возраст 21-40 лет не зависимо от половой принадлежности.

В заключении хочется отметить, что гистологический метод исследования остается одним из наиболее доступных, рациональных методов, позволяющих более точно и достоверно решать многие вопросы при проведении исследований и экспертиз трупов, особенно в случаях неясной макроскопической картины.

ГУЗОТ «Кемеровское областное бюро судебно-медицинской экспертизы», г. Кемерово
Одним из условий для выполнения качественного судебно-гистологического исследования, кроме оснащенности отделения и уровня подготовки врачей, является правильный, целенаправленный забор биоматериала экспертами-танатологами. Вопрос не новый и является предметом постоянного обсуждения как на страницах периодической печати (Пермяков А. В., Ломаева Г. П., 1970; Гедыгушева Н. П., Буланова Э. В., 1997; Мальцев С. В. с соавт., 2004; Головин В. С. Мальцев С. В., 2006 и др.), так и на Областных совещаниях судебных медиков Кемеровской области. Однако материалы последних плановых и внеплановых проверок судебно-медицинской деятельности отделений КОБ-СМЭ за 2006 г. показали, что до настоящего времени рядом судебно-медицинских экспертов допускаются существенные нарушения требований Приказа №161 от 24 апреля 2003г. «Об утверждении инструкции по организации и производству экспертных исследований в бюро судебно-медицинской экспертизы» и других нормативных документов по судебно-медицинской экспертизе.

Ранее проводимая систематизация выявленных недостатков в полноте, качестве и целесообразности забора биоматериала, а также в оформлении сопроводительных документов позволила объединить их в две группы:

Нарушения по небрежности;
Тактико-диагностические.

Учитывая количество допускаемых нарушений и их частоту. Выявленные дефекты забора биоматериала на судебно-гистологическое исследование были выделены в две группы:

Постоянно встречающиеся и
Периодически встречающиеся.

1. В Приказе МЗ РФ от 24.04.2003 № 161 в п.п. 2.3.1.6-2.3.1.10. обозначены правила и условия фиксации кусочков для гистологического исследования, однако из отдельных отделений продолжают поступать плохо фиксированный и подверженный гнилостным изменениям биоматериал. Это прежде всего связано с нарушениями при подготовке раствора формалина («на глазок ») и условий хранения фиксируемого материала.

2. В п. 2.3.1.3. Приказа указано: «. кусочки вырезают толщиной 0,5-1,0 см, длина и ширина может быть различной (обычно 1,0-1,5 см. или 1,5-2,0 см.) с таким расчетом, чтобы получаемый срез поместился на стандартное покровное стекло. В то же время создается впечатление, что у некоторых экспертов другие метрические единицы, значительно превышающие общепринятые, что также приводит к плохой фиксации и создает определенные трудности при подготовке микропрепаратов.

3. Наиболее часто встречающимся нарушением (вопреки п. 2.3.1.5. Приказа №161) является: отсутствие или нарушение маркировки объектов. Во всех учебниках, руководствах по судебной медицине, правилах и приказах «красной строкой» выделено - «. подпись на этикетках делают черным графитовым карандашом. Для этикеток используют материал устойчивый к действию фиксирующей жидкости (клеенка, фотобумага и др.). ». И все же отдельные эксперты, не думая о последствиях продолжают писать авторучкой. Кроме того, никто не просит экспертов завязывать «Гордиев узел», который смог разрубить только Александр Македонский, а требуется только аккуратно и надежно зафиксировать кисеты. Однако, иногда в судебно-гистологическое отделение продолжают поступать банки в которых отдельно плавают кисеты и перемешенные кусочки внутренних органов и тканей. Как следствие это приводит к путанице и значительно снижает диагностическую ценность микроскопического исследования при постановке диагноза и составлении экспертных выводов.

1. Соответствие - «. Соглашение между чем-либо, выражающее согласованность. » (Ожегов СИ., 1986). В данном случае речь идет о несоответствии фактически присланных объектов с количеством объектов указанных в направлении. Так например: при диагнозе «Общее переохлаждение организма», указанный в направлении желудок не присылается; при диагнозе «ИБС» не присылаются кусочки сердца и т.д. В данных случаях эксперты «забыли» о пункте 2.3.1.13. Приказа № 161 «. количество кусочков взятых из тех или иных органов и тканей, определяется выраженностью патологического процесса, а также задачами исследования. »

2. В отдельных случаях в нарушение Приказа № 161 п.2.3.1.17. в направлениях не указывается макроскопическая характеристика органов и тканей. Не исключением является отсутствие указания на топографию взятых кусочков, не указывается цель исследования. В случаях смерти в стационаре не упоминается время пребывания в стационаре, не пишется клинический диагноз.

3. Анализируя причины перечисленных выше нарушений забора биоматериала можно отчасти согласиться с В.А. Кондратьевым и И.Н. Богомоловой - авторами статьи «Критический анализ современной научно-практической информации по судебно-медицинской гистологии», которые пишут что «. Серьезную проблему представляет собой разобщение между судебно-медицинской танатологией и судебно-медицинской гистологией. Как известно, в большинстве судебно-медицинских учреждений вскрытие трупов проводит один эксперт, а микроскопическое другой. ». Однако, мы считаем, что указанные нарушения являются прежде всего результатом слабого знания положений Приказа № 161 от 24 апреля 2003 г. «Об утверждении инструкции по организации и производству экспертных исследований в бюро судебно-медицинской экспертизы», и других нормативных документов, усугубляющегося элементарной небрежностью при выполнении профессиональных обязанностей, и это несмотря на то, что все эксперты письменно подтвердили изучение данного приказа.

Таким образом, сказанное заставляет руководство бюро в 2008 году пересмотреть формы контроля за деятельностью городских, районных и межрайонных отделений КОБСМЭ и ужесточить меры административного и экономического воздействия в отношении заведующих отделениями и врачей судебно-медицинских экспертов, допускающих нарушения своих профессиональных обязанностей.

Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.

О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.

Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?

Кусочек ткани пациента: кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, костей, головного и спинного мозга и т.п., так называемый биоптат.

Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.

Пункционная биопсия – «тычок», тонкой или толстой иглой. Пункционные биоптаты редко имеют диаметр больше 1-2 мм.
Ножевая биопсия – открытая или эндоскопическая (малоинвазивная), в том числе лапароторако-медиастиноскопия.

Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.

Операционный материал – это все что удалено во время операции, как правило, орган или его часть, или несколько органов и/или их частей с образованием (опухолью) или без него.

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.

Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.

Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.

Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.

2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.

В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).

Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.

Процесс получения парафиновых блоков.

3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.

4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.

Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.

Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).

Для чего делаются срезы?

Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.

Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.

Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.

Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).

Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?

Гистологическое исследование
Иммуногистохимия (ИГХ)
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), может быть хромофобной (принцип тот же, другой тип метки)

Что позволяют определить разные виды гистологических исследований

Гистологическое исследование – что это такое?

Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).

Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):

воспаление,
специфическое воспаление,
аномалия развития,
опухоль.

Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.

Окрашенные срезы под микроскопом

Инвазивный протоковый рак er 100%.

Карцинома сигмовидной кишки.

Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.

МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.

Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.

Низкодифферинцированный рак пищевода.

При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.

Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.

Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.

Иммуногистохимия (ИГХ)

Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.

Один из этапов ИГХ

ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.

При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).

Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.

Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.

Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.

Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.

Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.

В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.

Что определяется с помощью ИГХ?

Наличие рецепторов гормонов прогестерона и эстрогена при раке молочной железы;
Экспрессию HER-2/neu в клетках при раке молочной железы, раке желудка;
Определить ходжкинские и неходжкинские лимфомы — установить точный диагноз лимфомы на сегодняшний день невозможно без применения этого вида исследования.
Определить первичная это опухоль или метастазы, тканевую принадлежность метастазов.

Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)

Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.

FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.

В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.

Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.

Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.

Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.

Что определяется с помощью FISH-теста?

FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.

определяется наличие амплификации HER2 в случаях пограничного результата по данным ИГХ, что необходимо для назначения таргетной терапии;
проводится диагностика, то есть выявление генетических перестроек специфичных для определенного типа опухолей, когда невозможно окончательно установить диагноз при помощи более простых методик, чаще всего это саркомы мягких тканей и опухоли головного мозга;
генетические отклонения, вызывающие рак того или иного органа;
при лимфомах эта методика используется в диагностических целях и для выявления факторов неблагоприятного прогноза, то есть показаний для ранней интенсификации лечения.

Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.

За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.

Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.

Помните! Гистологические исследования – это отправная точка, от того насколько грамотно они выполнены зависит точность поставленного диагноза и эффективность назначенного лечения.

Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:

Качества стекол и блоков;
Комплектности предоставления стекол (необходимо предоставить все стекла и блоки);
Предоставление пациентом дополнительной информации, которая поможет верно интерпретировать данные гистологического исследования, ИГХ и FISH-теста, а именно: данные анамнеза заболевания, данные о сопутствующих заболеваниях, в первую очередь инфекционных (ВИЧ, гепатиты); все данные всех проведенных обследований и вмешательств: снимки — рентген, КТ, МРТ, УЗИ, протоколы операций, выписки.

После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.

Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?

Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):

Макроскопическое описание

Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.

Микроскопическое описание

Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».

Результаты иммуногистохимического исследования

В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.

Патологоанатомическое заключение

Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:

Это первичная опухоль или метастаз?
Где локализован первичный опухолевый очаг?
Каков гистологический тип опухоли (из клеток какого типа она состоит).

Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.

Дополнительные замечания и рекомендации

Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.

Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.

Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!

Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук

Что такое биопсия? Кому и зачем она назначается? Как проводятся эта манипуляция? На эти и другие вопросы ответила Мамедова Сабина Камрановна – врач ультразвуковой диагностики консультативно-диагностического Центра НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова. Она регулярно проводит обследования, направленные на раннее выявление онкологических патологий.

Что такое биопсия?

Биопсия – это взятие образцов тканей и клеток человека для последующей диагностики. Биопсия назначается пациентам в случае подозрения на онкологическое заболевание. Во время исследования врач вводит в подозрительное новообразование тонкую иглу, именно с ее помощью осуществляется забор исследуемого материала.

В большинстве случаев биопсия проводится под ультразвуковым наблюдением, т.е. игла вводится под контролем УЗИ-аппарата. Это позволяет точно визуализировать патологическое новообразование, а также кровоток вокруг него (чтобы не повредить сосуды и предотвратить образование гематом).

Когда пациента направляют на биопсию?

Если в ходе приема врач любой специализации обнаруживает у человека образование, то он направляет пациента к онкологу. Специалист определит характер новообразования – доброкачественное или злокачественное. В этом ему поможет ряд исследований, среди них – имуногистохимическое, гистологическое (тканевое) и/или цитологическое (клеточное). Чтобы это осуществить, онколог направит пациента на биопсию, т.е. забор клеток и тканей новообразования.

Какие виды биопсии бывают?

Пункционная тонкоигольная. Во время манипуляции в новообразование вводится тонкая игла и производится забор материала для цитологического (клеточного) исследования.

Трепан-биопсия. Выполняется под местной анестезией. Во время манипуляции врач вводит в новообразование специальную трепан-иглу и выполняет забор гистологического (тканевого) материала.

Стереотаксическая биопсия. Это более сложная манипуляция, которая проводится в операционной. С помощью специальных аппаратов врачи делают снимки исследуемой локализации. Снимки накладываются друг на друга, что позволяет получить объемное изображение. На его основе специалисты выбирают место введения иглы.

На каких органах проводится биопсия под УЗИ-навигацией?

Данная манипуляция проводиться на молочной железе, щитовидной железе, лимфоузлах различной локализации. Ее применяют для пункции патологических очагов в глубоко расположенных органах (печень, поджелудочная железа, селезенка, почки, опухоли грудной клетки, малого таза, забрюшинного пространства).

Как осуществляется биопсия?

Пациент во время манипуляции находится в положении лежа. Предварительно врач выполняет обезболивание. В большинстве случаев достаточно местной анестезии. Специалист проводит контрольное УЗИ, определяет точное месторасположение новообразования. После того, как анестезия подействует, врач осуществит забор тканей патологического участка. Чаще всего пациент не испытывает болезненные ощущения, но может чувствовать легкое надавливание, жжение, покалывание. Когда забор материала произведен, врач извлекает иглу, а место прокола обрабатывает анестетиком. В некоторых случаях рекомендуется приложить холод на 30-40 минут.

Как быстро заживет прокол?

Разрез от иглы заживает быстро – около 2-3 дней. Один-два дня после манипуляции лучше избегать сильных физических нагрузок и занятий спортом.

Куда направляется биоматериал, полученный во время биопсии?

После выполнения биопсии полученные фрагменты тканей направляют в лабораторию, где проводится их гистологический(тканевый) и/или цитологический(клеточный) анализ. Исследование выполняется в срок от 14 до 45 дней. На основе полученного гистологического и/или цитологического исследования, лечащий врач выберет дальнейшую тактику лечения или наблюдения.

Список литературы:

Мититьков В.В. «Практическое руководство руководство по ультразвуковой диагностике диагностике. Общая ультразвуковая диагностика» , 2018 год, С.69.

Hederstorm E, Forsberg L, Floren CH et al. Liver biopsy complications monitored by ultrasound. Hepatol. 1989. Vol. 8. P. 94.4.

Ткачев В.Д., Логинов А.Г., Аруин Л.И. Современные представления о роли чрескожной биопсии печени в клинической практике. Хронический гепатит. Сб. науч. тр. М., 1988. С. 71.

Алауи Аль-Асс Абдулмаджид. Ультразвуковая диагностика и мини-инвазивные вмешательства при объемных образованиях брюшной полости. Автореф. дис. … канд. мед. наук. Саранск, 2004. С. 17.

Авторская публикация:
Мамедова Сабина Камрановна, врач ультразвуковой диагностики консультативно-диагностического Центра ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России

Читайте также: