Забор материала на дифтерию

Обновлено: 15.04.2024

Лечение дифтерии. Принципы лечения дифтерии. Профилактика дифтерии. Иммунопрофилактика дифтерии. Дифтерийный анатоксин.

Поскольку патогенез поражений обусловлен действием токсина дифтерии, то основу специфической терапии составляет противодифтерийная лошадиная сыворотка (дифтерийный антитоксин), содержащая не менее 2000 международных антитоксических единиц активности (ME) в 1 мл. Антитоксин вводят внутримышечно или внутривенно в дозах, соответствующих тяжести заболевания (от 20 000 до 100 000 ЕД). Открытие Э. Берингом и Ш. Китазато антитоксических свойств сыворотки иммунных животных явилось одним из важных этапов развития микробиологии, а практическая медицина получила возможность противостоять этой высоколетальной инфекции. Параллельно назначают эффективные антимикробные препараты (аминогликозиды, цефалоспорины), а также проводят симптоматическую терапию. Выписку больных проводят только после двукратного отрицательного результата бактериологического обследования.

Профилактика дифтерии. Иммунопрофилактика дифтерии. Дифтерийный анатоксин

Первоначально развитие заболевания предупреждали введением инактивированного антисывороткой дифтерийного токсина. В настоящее время основу профилактики дифтерии составляют плановая или постэкспозиционная вакцинация.

Для иммунопрофилактики дифтерии применяют дифтерийный анатоксин, разработанный Рамоном.

Дифтерийный анатоксин — токсин, лишенный ядовитых свойств обработкой 0,4% раствором формалина и выдержкой в термостате при температуре 40 °С в течение 30 сут, но сохранивший иммуногенность. Очищенный и концентрированный препарат входит в состав комбинированных вакцин — АКДС, АДС, АДС-М.
• Наличие и содержание AT к дифтерийному токсину определяют в РПГА и РИГА.
• Постинфекциошшй иммунитет нестойкий, поэтому реконвалесценты подлежат вакцинации в общем порядке.
• При выявлении заболевания в детских коллективах контактировавших с заболевшими детьми лиц следует обследовать бактериологически и изолировать от коллектива на 7 сут.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Показания: подозрение на дифтерию, ангину; контактным с больным дифтерией; обследование декретированных групп.

Противопоказания: нет.

Оснащение:

1. Две сухие стерильные пробирки промаркированные «Н» и «З»

2. Стерильные прямые ватные тампоны в комплекте с пробирками или в отдельной упаковке

3. Шпатель стерильный в крафт-пакете

4. Штатив для пробирок

4. Термоконтейнер для транспортировки

4. Стерильные перчатки, маска

5. Лоток для использованного материала.

6. Емкость с дез.раствором

Подготовка пациента:

1.Установить доброжелательное отношение с пациентом.

2. Проинформировать пациента о предстоящей манипуляции и ходе ее выполнения, получить информированное согласие.

3. Помочь пациенту занять нужное положение, лицом к источнику света.

Техника выполнения:

1.Оформить направление, промаркировать пробирки в соответствии с направлением, на одной поставить метку «Н», на другой метку «З».

I. Забор мазка из носа:

1. Повести гигиеническую обработку рук, надеть перчатки.

2. Взять пробирку с тампоном и меткой «Н» в левую руку и предложить пациенту слегка запрокинуть голову, правой рукой извлечь из пробирки тампон.

3. Первым пальцем левой руки слегка приподнять кончик носа пациента, правой - осторожно, стараясь не касаться наружной поверхности носа, легким вращательным движением ввести тампон в нижний носовой ход с одной, а затем с другой стороны.

4. Извлечь тампон из полости носа и осторожно опустить в пробирку, не касаясь стенок пробирки.

5. Поставить пробирку в штатив.

II. Забор мазка из зева:

1. Попросить пациента запрокинуть голову, широко открыть рот.

2. Взять в левую руку 1 и 2 пальцами шпатель, пробирку с тампоном и меткой «З» разместить между 4 и 5 пальцами, надавить шпателем на язык, не касаясь корня, а правой рукой извлечь из пробирки стерильный тампон (держась только за пробку) и ввести его в зев.

3. Осторожно провести тампоном сначала по правой дужке, правой миндалине, далее - по левой миндалине и левой дужке, при наличии фибринозных налетов, материал собирают на границе здоровой и пораженной ткани.

4. Извлечь тампон из полости рта, не касаясь слизистой оболочки рта и языка,

и осторожно опустить его в стерильную пробирку, не касаясь стенок пробирки.

5. Поставить пробирку с тампоном в штатив.

6. Штатив с пробирками поместить в термоконтейнер для транспортировки.

7. Обработать перчатки и использованный материал в соответствии с требованиями санэпидрежима.

8. Провести гигиеническую обработку рук.

9. Доставить материал в бактериологическую лабораторию.

Возможные осложнения: травма слизистой оболочки.

Примечание: забор материала производить натощак, или через 2 часа после еды, питья, полоскания ротовой полости; материал отправляется в лабораторию не позднее 2-х часов после забора; в инфекционных отделениях, возможно выполнение посева сразу на питательную среду на чашку Петри, сразу отправив посев в термостат.

Дифтерия относится к инфекционным болезням, развитие которых обусловлено заражением организма бактериями. Для патологии характерно появление пленочного налета на поверхности пораженных органов, например, в ротоглотке, носовых ходах, глазах или ушной раковины. Для постановки диагноза при подозрении на инфекционное заболевание врач направляет пациента на мазок на дифтерию из носа и зева.

Содержание статьи

Заподозрить активацию палочки Леффлера (инициатора развития дифтерии) можно на основании некоторых симптомов:

острое начало;
фебрильная гипертермия, когда температура превышает 38 градусов;
цефалгия (головные боли);
недомогание;
учащенное сердцебиение;
лимфаденит, при котором близко расположенные с воспалительном очагу лимфоузлы увеличиваются в диаметре, при прощупывании становятся болезненными, уплотненными.

Через 3 суток от начала болезни температура снижается до субфебрильных показателей, а фибринозные пленки уплотняются, приобретают перламутровый окрас.

Не пытайтесь самостоятельно удалить пленки с миндалин, носа. Это приводит к обнажению раневой поверхности и появлению кровоточивости.

Акцентируем внимание, что существует токсическая форма болезни. Для нее характерна гектическая лихорадка, выраженная слабость. Признаком прогрессирования дыхательной, кардиальной недостаточности является появление акроцианоза (посинение ушей, носа, носогубной зоны, пальцев), а также снижение артериального давление и нарастание тахикардии.

При этом пациента могут беспокоить галлюцинации, как проявление интоксикации, гипоксического поражения структур головного мозга. Также наблюдается возбуждение, тошнота, гнусавость голоса, затрудненное дыхание, одышка и отечность шеи.

Дифтерийный токсин приводит к развитию крупа, когда поражается трахея и бронхиальное дерево. Симптоматически патология проявляется лающим кашлем, который постепенно становится беззвучным и развивается асфиксия.

В связи с высокой токсичностью возбудителя в детском возрасте проводится вакцинация с последующей ревакцинацией. Несвоевременное лечение болезни приводит к развитию:

инфекционно-токсического шока;
асфиксии;
почечной дисфункции (нефроз, ренальная недостаточность);
поражению нервов;
миокардита;
полиорганной недостаточности (при токсической и гипертоксической формах).

Показания для анализа

В ряде случаев мазок на дифтерию и другую патогенную флору проводится при подозрении на развитие заболевания. Однако с профилактической целью исследование показано:

при трудоустройстве в лечебные, детские учреждения, в пищевую сферу;
перед посещением учебных учреждений;
беременным для определения риска возможных осложнений;
после контакта с больным человеком;
для подбора лекарственной терапии.

Таким образом, профилактическое исследование дает возможность предупредить развитие эпидемий, связанных с распространение инфекционных возбудителей.

Особенности диагностики

Различают несколько штаммов палочки Леффлера. Они отличаются по культуральным, структурным и ферментативным свойствам. Для подтверждения диагноза врач бактериальный анализ на дифтерию. Исследуя материал, специалист обнаруживает бациллу Леффлера, что в сочетании с клинической картиной является достоверным фактором болезни.

Для обнаружения инфекционного агента может потребоваться до полусуток, при условии, если пациент не принимал лекарственные препараты.

Когда мазок из зева берется на фоне антибактериальной терапии, рост бактерий значительно замедляется, а результаты диагностики не считаются достоверными. В таком случае целесообразно использовать серологические методы исследований.

Чаще всего для этого назначается РПГА, которая проводится в течение первых 3 суток и спустя неделю постановки диагноза. Диагностический метод дает возможность выявить антитела к токсину дифтерийной бактерии. Положительный результат отмечается при увеличении антител в 4 и более раз. Таким образом, можно найти людей с низким уровнем иммунной защиты против дифтерийного токсина.

При отсутствии антител на дифтерийный токсин проводится вакцинация с помощью АКДС.

Подготовка к сдаче мазков

Когда требуется мазок на дифтерию, как сдавать анализ разберем несколько позже. Сейчас остановимся на подготовительном этапе. Он включает:

прекращение приема антибактериальных средств за 10 дней до диагностики;
использование растворов для полоскания ротовой полости, ротоглотки с антисептическими компонентами запрещается за 5 суток до исследования;
анализ сдается натощак;
в день диагностики не рекомендуется чистить зубы.

Забор материала

Необходимый материал для диагностики берется из зева и носа. Вначале пациент наклоняет назад голову, максимально широко открывает ротовую полость. Специалист фиксирует язык металлическим или деревянным пластырем, принимая его ко дну полости рта.

Стерильным тампоном на удлиненной петле специалист проводит по слизистой оболочке ротоглотки. В процессе введения и выведения из ротовой полости тампона он не должен соприкасаться с другими поверхностями. Материал на тампоне опускается в пробирку, благодаря которой он транспортируется в лабораторию без повреждений и гибели микробов.

Набранный материал следует посеять в первые 2 часа. В процессе забора материала человек может испытывать неприятные ощущения или позыв на рвоту (особенно те пациенты, у которых повышен рвотный рефлекс).

Далее врач приступает к взятию мазка из носового хода. Для этого пациент также наклоняет голову назад, очищается носовой ход от слизи, а кожные покровы обрабатываются спиртом.

Стерильный тампон на удлиненной петле необходимо вводить поочередно в носовые ходы, плотно соприкасаясь с поверхностью слизистой оболочки. После этого тампон опускается в стерильную пробирку, и отправляют ее в лабораторию.

Микроскопическое исследование

Взятый из ротоглотки материал подвергается микроскопии. Для этого врач наносит его на предметное стекло, окрашивает специальными красителями и изучает клеточный состав.

Морфологические признаки дифтерийной палочки настолько различны, что микроскопия используется, как предварительное исследование перед посевом. Оно дает возможность проанализировать состав флоры. Окраска может проводится по Граму, Леффлеру (наиболее информативный, часто используемый) и Нейссера.

В мазках дифтерийные палочки расположены, как римская цифра 5.

Посев материала

Для обеспечения оптимальных условий для роста и размножения бактерий необходимо подобрать специальную питательную среду. Посев на дифтерию осуществляется в стерильном боксе на свернутую сыворотку Ру, теллуритовые дифсреды, сывороточно-/кровяно-теллуритовый агар или среду Клауберга.

Материал помещают в среду, затем рассеивают по поверхности. Для этого применяется чашка Петри. Инкубация посевов осуществляется в условиях термостата. Ежедневно контролируется рост и характер вырастающих колоний. С целью выделения чистой культуры пересеиваются колонии на селективные питательные среды.

Благодаря бакпосеву и дополнительной диагностике удается подтвердить диагноз инфекционного заболевания и своевременно принять меры по лечению больного человека и предупреждению распространения инфекции среди его окружения.

Выявление дифтерийной палочки. Принципы микробиологической диагностики дифтерии. Диагностика дифтерии. Культивирование дифтерии. Определение токсигенности дифтерийной палочки.

С целью раннего выявления дифтерии и определения носителей дифтерийной палочки необходимы выделение и идентификация возбудителя, а также определение его способности к токсинообразованию. Материалом для исследования служат дифтеритические плёнки, слизь из носоглотки или отделяемое из подозрительных поражений кожных покровов.

Забор материала на дифтерию проводят двумя стерильными тампонами: один используют для посева, с другого делают мазки и окрашивают их по Граму и Найссеру. Взятый материал следует доставлять в лабораторию не позднее чем через 3 ч.

Бактериоскопия дифтерийной палочки

Окраска по Граму не является специфичной, так как дифтерийные палочки сравнительно плохо воспринимают красители, но позволяет косвенно идентифицировать непатогенные коринебактерии, располагающиеся в виде палисада (параллельно) или в виде китайских иероглифов. Окраска по Найссеру позволяет выявить характерные зёрна Бабеша-Эрнста и отличить дифтерийную палочку от ложнодифтерийной палочки С. pseudodiphtheriticum (С. hofmannii), часто обитающей в носоглотке.

Культивирование дифтерийной палочки

Бактерии дифтерии выделяют посевом на элективные среды с теллуритом (например, Клауберга II или Маклёода), ложнодифтерийная палочка (палочка Хофманна) теллур не восстанавливает (см. рис. 8 на вклейке). Для выделения чистой культуры дифтерии часть подозрительной колонии засевают на скошенный агар (или среду Ру), вторую часть — на твёрдую питательную среду для определения токсигенности и (не обжигая петли) проводят определение цистиназной активности (проба Пизу). При положительном результате наблюдают образование коричневого облачка вокруг линии укола. Чистую культуру идентифицируют на средах Хйсса, пользуясь укороченным пёстрым рядом (глюкоза, мальтоза, сахароза, мочевина), что позволяет отличить С. diphtheriae от непатоген пых коринебактерии (рис. 14-3).

Для идентификации биоваров дифтерии используют «длинный» ряд углеводов, включающий крахмал и гликоген. Для полной идентификации можно исследовать способность бактерий расти в анаэробных условиях посевом уколом в столбик 0,5% сахарного агара (растёт только С. diphtheriae).

Определение токсигенности дифтерийной палочки

Определение токсигенности дифтерийной палочки in vivo. Проводят подкожным или внутрикожным заражением 0,5-1,0 мл бактериальной культуры морских свинок массой 250 г. За 24 ч до заражения одно животное иммунизируют дифтерийным антитоксином. При положительном результате неиммунизированные животные погибают в течение 3-5 сут.

Определение токсигенности дифтерийной палочки in vitro. Способность к образованию токсина можно определять заражением куриных эмбрионов или культур клеток с регистрацией последующего цитопатнческого эффекта. Можно использовать твердофазный ИФА с использованием антитоксинов, меченных пероксидазой. Также предложены ПЦР и ДНК-зонды для обнаружения гена tox в бактериальной хромосоме. Однако наибольшее распространение получил тест иммунодиффузии Илека. На среду с пониженным содержанием Fe2+ (для более интенсивного токсинообразования) проводят посев исследуемого изолята и эталонных токсигенного и нетокси-генного штаммов параллельными штрихами. На выросшие колонии накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанной дифтерийным антитоксином. Образующийся токсин и антитоксин диффундируют в агар и в месте встречи образуют линии преципитации, так называемые «усы» или стрелы. На практике используют модификацию метода. Полоску бумаги, пропитанную антитоксином (500 ME в 1 мл), наносят на чашку, а исследуемые культуры засевают бляшками по обе стороны бумажной полоски. Контролем служит заведомо токсигенная культура, также посеянная «бляшкой». В результате встречной диффузии токсина и антитоксина в месте их контакта выпадает линия преципитации, сливающаяся с линией преципитации токсигенного штамма.

Фаготипирование дифтерийной палочки

Для дифференциальной диагностики возбудителей используют набор из 9 кори нефагов. С его помощью можно типировать большинство токсигенных и нетоксигенных штаммов биовара gravis.

Для проведения бак-исследования требуется мазок из зева и носа. Он позволяет оценить качественные, а также количественные характеристики микрофлоры, живущей на слизистой рото- и носоглотки. Выявив патогенные микроорганизмы при диагностике, врач имеет возможность подтвердить инфекционное заболевания, а также определить чувствительность микробов на действие некоторых антибиотиков.

Содержание статьи

Среди показаний, когда назначается анализ из зева на микрофлору, стоит выделить:

тонзиллит, обусловленный активацией стрептококка;
фурункулез, развивающийся вследствие размножения стафилококков;
подозрение на дифтерию, когда необходимо выявить бациллы Леффлера;
наличие симптомов, указывающих на менингококковую или коклюшную инфекцию;
простудные заболевания;
подозрение на стенозирующий ларингит или мононуклеоз.

Кроме того, диагностика проводится с профилактической целью для выявления людей с бактерионосительством после контакта с больным человеком, при трудоустройстве в детские, лечебные учреждения, заведения для питания, перед посещением учебных заведений. Зачастую назначается мазок из зева и носа на стафилококк.

Также обследованию подвергаются беременные женщины для установления риска развития заболевания и тяжелых последствий.

Микрофлора носоглотки

На поверхности слизистой оболочки рото- и носоглотки живет множество микробов, которые относятся как к полезным, так и болезнетворным микробам. В норме даже болезнетворные микроорганизмы могут входить в состав флоры, однако не вызывать развитие заболевания. Все зависит от их количества.

При определенных условиях, например, снижении иммунитета на фоне ОРВИ, общего переохлаждения, обострения хронической патологии, происходит активация патогенных бактерий, и они начинают интенсивно размножаться.

В мазках при отсутствии заболевания присутствуют такие виды микроорганизмов, как кишечная палочка, стрептококки, менингококки, эпидермальный стафилококк, непатогенные нейссерии, бакте-, дифтероиды, псевдомонады, клебсиеллы пневмонии, актиномицеты, грибки и другие микроорганизмы.

Приблизительно 20% населения Земли являются носителями золотистого стафилококка, однако развития заболевания у них не наблюдается.

При благоприятных для бактерий условиях условно-патогенные микробы способны вызывать заболевания. Также болезни могут развиваться при первичном инфицировании организма, оседая на слизистые оболочки верхних респираторных путей.

Среди микроорганизмов, способных провоцировать развитие патологии, следует отметить гемолитический стрептококк, пневмо-, менингококк, золотистый стафилококк, бациллы Леффлера, гемофильная палочка, бранхамеллы, листерия, бордетелла, грибки и множество других микробов.

Подготовительный этап

Для получения максимально точных результатов исследования необходимо соблюдать следующие рекомендации:

за неделю до сбора материала прекращается прием антибактериальных препаратов;
полоскание, использование спрея с противомикробным действием запрещается за 2 суток до диагностики;
анализ проводится натощак;
перед исследованием не следует чистить зубы, использовать жвачку, пить воду.

Только придерживаясь перечисленных правил, мазок на флору из зева покажет достоверный результат.

Техника проведения

Чтобы взятие мазка из зева несколько облегчить, необходимо пациенту наклонить голову назад и максимально широко раскрыть ротовую полость. Материал из носа и зева берется стерильным тампоном, фиксированным на удлиненной петле.

Вначале специалист прижимает язык металлическим или деревянным шпателем ко дну полости рта, чтобы четко визуализировать место забора материала. Затем тампон опускается в стерильную пробирку, что предупреждает гибель микроорганизмов при транспортировке. Материал следует отвезти в лабораторию за 90 минут.

Во время введения и извлечения тампона изо рта, он не должен соприкасаться с другими поверхностями. Если техника взятия мазка из зева и носа не будет соблюдаться, результаты считаются недостоверными.

Стоит заметить, что процесс забора материала не вызывает болезненности, однако провоцирует рвотный позыв, особенно у людей с повышенным рвотным рефлексом.

Алгоритм выполнения мазка из носа практически не отличается:

пациент наклоняет голову назад;
носовой ход с обеих сторон очищается от слизи;
кожные покровы вокруг ноздрей необходимо обработать антисептиком;
стерильный тампон вводится в ходы носа, плотно соприкасаясь с поверхностью слизистой оболочки;
тампон помещают в стерильную пробирку и отправляют в лабораторию.

Микроскопический анализ

Перед посевом материала необходимо провести микроскопическое исследование. Для этого набранный материал располагается на предметном стекле, которое фиксируется над пламенем горелки. Окраска проводится по методу Грама, что дает возможность визуализировать клеточный состав.

В мазках могут обнаруживаться коккобацилы, грамположительные, грамотрицательные микробы и кокки, а также исследуется их морфология. В зависимости от расположения бактерий удается различить их по видовым принадлежностям:

грамположительные кокки, располагающиеся группами в виде виноградной грозди, являются стафилококками;
грамположительные кокки, напоминающие цепочку, или располагаются попарно, считаются стрептококками;
нейсерии окрашиваются по Граму отрицательно, также являются кокками;
клебсиеллы визуализируются в виде грамотрицательных палочек с округлыми концами, а также капсулой со светлой окраской;
синегнойные палочки обнаруживаются как небольшие грамотрицательные палочки.

На основании результатов микроскопической диагностики врачу удается предположить, какие колонии могут вырасти на питательной среде.

Посев материала

Для каждого микроорганизма необходимы определенные питательные среды с учетом pH и уровня влажности. Основная задача питательной среды заключается в обеспечении микроорганизмов питания, дыхания для ростового ускорения и размножения.

Посев осуществляется в стерильном боксе, соблюдая правила асептики. Специалист, работающий в лаборатории, должен помнить о средствах защиты, так как биологический материал может быть инфекционно опасным.

Мазок из носа сеют на среду, после чего выращивают в условиях термостата. Ежедневно необходимо оценивать рост и форму вырастающих колоний. Через 5 суток анализируется конечный результат. Различают несколько наиболее распространенных сред для получения колоний бактерий:

кровяной агар относится к высокочувствительному типу сред, обеспечивает благоприятные условия для роста сапрофитных, а также патогенных микробов. Патогенность пневмококка, а также стафилококка оценивается путем анализа характера роста, окраски и площади гемолизированного участка. Гемолитическая активность бактерий считается основным патогенным фактором.
среда Сабуро - оптимальная для размножения множества видов микробов.
Желточно-солевой агар используется для получения колоний стафилококковых микробов.
Шоколадный агар относится к неселективным, обогащенным средам, получается путем добавления нагретой крови. Применяется для размножения патогенных микроорганизмов. Эта питательная среда хорошо подходит для менинго-, конококков и гемофильной палочки.
Из сред для энтеробактерий применяется среда Эндо.
Культивирование энтерококков осуществляется на энтерококкагаре.

Результаты диагностики

После оценки формы, окраски и других особенностей колоний бактерий, специалист предоставляет окончательный результат:

отрицательный – означает отсутствие бактериальной и грибковой флоры в материале. В таком случае причиной развития болезни может стать вирусный возбудитель.
положительный – указывает на наличие патогенных/условно-патогенных микробов, которые способны вызвать заболевание. Активизация и стремительное размножение условно-патогенных микробов происходит при снижении иммунитета. При наличии грибковой флоры, в частности, дрожжеподобных грибов Candida, может развиваться кандидоз ротовой полости.

Врач направляет пациента сделать мазки из зева и носовых полостей при подозрении на инфекционное происхождение болезни. Благодаря комплексной диагностике врач имеет возможность определить состав микрофлоры слизистой оболочки. Это позволяет поставить точный диагноз и определить дальнейшую лечебную тактику.

Читайте также: