Забор материала для гистологического исследования

Обновлено: 01.05.2024

Онкологические пациенты часто слышат от врача фразы «анализ на цитологию» или «гистологию». Давайте разбираться что это такое.

В академическом смысле, гистология — это наука, которая занимается изучением строения ткани. Цитология — это наука, которая изучает клетки, особенности их размножения, роста и трансформации. В медицине знания, накопленные этими науками, используют для постановки предварительного и окончательного диагноза при различных заболеваниях, в частности при онкологии. Соответственно проводятся цитологические и гистологические методы исследования.

Цитологическое исследование

Цитологическое исследование проводится для оценки морфологических особенностей клеточных элементов тканей различных органов, жидкостей и выделений организма. Этот анализ позволяет выявить диспластические и злокачественные трансформации отдельных клеток и поставить предварительный диагноз. Для окончательной диагностики потребуется гистологическое исследование.

Доступность метода.
Не требуется специального дорогостоящего оборудования.
Исследование проводится быстро, буквально в течение часа.
Забор материала проводится неинвазивными или малоинвазивными методами.
Относительно низкая цена.

Все эти особенности делают возможным широкое использование цитологического исследования, в том числе и в рамках скрининга разных патологий.

В зависимости от особенностей получения материала, цитологию можно разделить на дооперационную и интраоперационную. Дооперационная цитология делится на три вида:

Эксфолиативная. Материалом исследования служит отделяемое мочеполовых органов, мокрота, выпотные жидкости, моча, цереброспинальная жидкость и др. Недостатком такого исследования является плохая сохранность материала и, как следствие, погрешности в диагностике. Клетки могут быть разрушены из-за воспалительных процессов, особенностей забора и других факторов.
Абразивная. Материалом служат соскобы с определенных участков внутренних органов. Для забора материала используются специальные инструменты, например цитощетки, и даже фиброоптическая техника. Таким методом получают материал с шейки матки, стенок желудочно-кишечного тракта и др. При таком заборе клетки хорошо сохраняются и результат легче интерпретировать.
Аспирационная цитология с помощью тонкоигольной биопсии позволяет получить препарат практически из любого органа. Наибольшее распространение методика получила для предварительной диагностики новообразований молочной железы.

При всех своих преимуществах, цитологического исследования недостаточно для постановки окончательного диагноза в онкологии. Метод больше направлен на констатацию факта наличия рака. но есть современные технологии, например, дополнительное окрашивание с применением антител, которые позволяют более точно определить предварительный диагноз и спланировать лечение.

Гистологическое исследование

Гистологическое исследование изучает не отдельные клетки, а фрагмент ткани. На сегодняшний день это единственный метод окончательной верификации большинства новообразований, в том числе и злокачественных. Это сложный метод, который предполагает разные техники забора материала, обработки ткани и даже разные способы микроскопии.

Для забора материала проводятся следующие виды биопсии:

Щипковая — с помощью щипчиков откусывается кусочек ткани.
Кюретаж — полый орган выскабливается с помощью ложечки-кюретки с острыми краями.
Толстоигольная пункционная биопсия — берется столбик ткани из разных мест органа.
Эксцизионная биопсия — удаляется весь орган или все новообразование и потом исследуется по отдельным фрагментам.

Полученный материал заливают в парафиновые блоки и нарезают на тончайшие срезы (около 1 микрона). Потом их окрашивают различными красителями и исследуют под микроскопом. Подготовка материала может занимать от нескольких дней до нескольких недель.

Во время микроскопии врач патоморфолог оценивает строение клеток, их взаимоотношение в рамках слоя ткани и правильность расположения слоев. Для уточнения информации могут использоваться дополнительные методы окрашивания, которые визуализируют разные структуры клеток, например, рецепторы, мембраны и даже отдельные гены.

Как подготовиться к исследованию

Для неинвазивных методов цитологии особой подготовки не требуется. А вот для проведения биопсии, в том числе и для тонкоигольной, лучше быть натощак, поскольку забор материала будет проводиться инвазивно и скорее всего потребует обезболивания. То же касается эндоскопических методов исследования.

В ряде случаев на первом этапе проводят цитологическое исследование, выставляют предварительный диагноз, планируют лечение и объем операции. И уже инраоперационно, во время онкохирургического вмешательства берут биопсию. По ее результатам устанавливается окончательный диагноз и при необходимости проводится коррекция лечения.

Что такое биопсия? Кому и зачем она назначается? Как проводятся эта манипуляция? На эти и другие вопросы ответила Мамедова Сабина Камрановна – врач ультразвуковой диагностики консультативно-диагностического Центра НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова. Она регулярно проводит обследования, направленные на раннее выявление онкологических патологий.

Что такое биопсия?

Биопсия – это взятие образцов тканей и клеток человека для последующей диагностики. Биопсия назначается пациентам в случае подозрения на онкологическое заболевание. Во время исследования врач вводит в подозрительное новообразование тонкую иглу, именно с ее помощью осуществляется забор исследуемого материала.

В большинстве случаев биопсия проводится под ультразвуковым наблюдением, т.е. игла вводится под контролем УЗИ-аппарата. Это позволяет точно визуализировать патологическое новообразование, а также кровоток вокруг него (чтобы не повредить сосуды и предотвратить образование гематом).

Когда пациента направляют на биопсию?

Если в ходе приема врач любой специализации обнаруживает у человека образование, то он направляет пациента к онкологу. Специалист определит характер новообразования – доброкачественное или злокачественное. В этом ему поможет ряд исследований, среди них – имуногистохимическое, гистологическое (тканевое) и/или цитологическое (клеточное). Чтобы это осуществить, онколог направит пациента на биопсию, т.е. забор клеток и тканей новообразования.

Какие виды биопсии бывают?

Пункционная тонкоигольная. Во время манипуляции в новообразование вводится тонкая игла и производится забор материала для цитологического (клеточного) исследования.

Трепан-биопсия. Выполняется под местной анестезией. Во время манипуляции врач вводит в новообразование специальную трепан-иглу и выполняет забор гистологического (тканевого) материала.

Стереотаксическая биопсия. Это более сложная манипуляция, которая проводится в операционной. С помощью специальных аппаратов врачи делают снимки исследуемой локализации. Снимки накладываются друг на друга, что позволяет получить объемное изображение. На его основе специалисты выбирают место введения иглы.

На каких органах проводится биопсия под УЗИ-навигацией?

Данная манипуляция проводиться на молочной железе, щитовидной железе, лимфоузлах различной локализации. Ее применяют для пункции патологических очагов в глубоко расположенных органах (печень, поджелудочная железа, селезенка, почки, опухоли грудной клетки, малого таза, забрюшинного пространства).

Как осуществляется биопсия?

Пациент во время манипуляции находится в положении лежа. Предварительно врач выполняет обезболивание. В большинстве случаев достаточно местной анестезии. Специалист проводит контрольное УЗИ, определяет точное месторасположение новообразования. После того, как анестезия подействует, врач осуществит забор тканей патологического участка. Чаще всего пациент не испытывает болезненные ощущения, но может чувствовать легкое надавливание, жжение, покалывание. Когда забор материала произведен, врач извлекает иглу, а место прокола обрабатывает анестетиком. В некоторых случаях рекомендуется приложить холод на 30-40 минут.

Как быстро заживет прокол?

Разрез от иглы заживает быстро – около 2-3 дней. Один-два дня после манипуляции лучше избегать сильных физических нагрузок и занятий спортом.

Куда направляется биоматериал, полученный во время биопсии?

После выполнения биопсии полученные фрагменты тканей направляют в лабораторию, где проводится их гистологический(тканевый) и/или цитологический(клеточный) анализ. Исследование выполняется в срок от 14 до 45 дней. На основе полученного гистологического и/или цитологического исследования, лечащий врач выберет дальнейшую тактику лечения или наблюдения.

Список литературы:

Мититьков В.В. «Практическое руководство руководство по ультразвуковой диагностике диагностике. Общая ультразвуковая диагностика» , 2018 год, С.69.

Hederstorm E, Forsberg L, Floren CH et al. Liver biopsy complications monitored by ultrasound. Hepatol. 1989. Vol. 8. P. 94.4.

Ткачев В.Д., Логинов А.Г., Аруин Л.И. Современные представления о роли чрескожной биопсии печени в клинической практике. Хронический гепатит. Сб. науч. тр. М., 1988. С. 71.

Алауи Аль-Асс Абдулмаджид. Ультразвуковая диагностика и мини-инвазивные вмешательства при объемных образованиях брюшной полости. Автореф. дис. … канд. мед. наук. Саранск, 2004. С. 17.

Авторская публикация:
Мамедова Сабина Камрановна, врач ультразвуковой диагностики консультативно-диагностического Центра ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России

Цитологическое исследование — одно из самых востребованных в онкологии. С его помощью врач оценивает состояние клеточных элементов и делает заключение о злокачественной или доброкачественной природе новообразования. Изучаются особенности строения клеток, клеточный состав органов, тканей, жидкостей организма человека. Цитологическое исследование применяется при диагностике предраковых заболеваний и злокачественных новообразований различных органов: шейки и тела матки, молочной железы, щитовидной железы, легких, кожи, мягких тканей и костей, желудочно-кишечного тракта, лимфатических узлов и др. Для цитологического исследования берут мазки свода влагалища и шейки матки, мокроту, мочу, экссудаты из полостей и т.д.

Когда назначается цитологическое исследование?

В большинстве случаев врачи – терапевты, гинекологи, онкологи и другие специалисты — прибегают к цитологической диагностике при подозрении на опухолевое заболевание.

Цитологический метод применяется для исследования новообразований в различных органах – кожа, молочная железа, лёгкие, средостение, печень, почки, забрюшинные образования, щитовидная железа, предстательная железа, яичко, яичники, лимфатические узлы, миндалины, слюнные железы, мягкие ткани, кости и др.

Наибольшее распространение цитологические исследования получили в области гинекологии. Это доступный и быстрый метод скрининга, доказавший свою эффективность в диагностике предраковых заболеваний и раннего рака шейка матки.

Нередки случаи, когда цитологическое исследование помогало обнаружить рак желудка, легкого, мочевого пузыря и др. на самых ранних стадиях, когда рентгенологические и эндоскопические исследования не выявили изменений.

В период лечения опухолевого заболевания необходимо постоянно контролировать эффективность проводимой терапии. Для этого необходимы быстрые и эффективные методы диагностики. Цитологическое исследование в этих случаях позволяет оперативно получить ответы на большинство возникающих у врачей вопросов по поводу течения болезни. Цитологическое исследование широко используется также и после окончания специализированного (хирургического, химиотерапевтического или лучевого) лечения для контроля течения заболевания и раннего выявления возможного рецидива или прогрессирования опухоли (исследование лимфатических узлов, плеврального экссудата и т.д.).

Основные области применения цитологических исследований в онкологии:

Скрининг, профилактические осмотры
Диагностика – установление и уточнение диагноза
Контроль результатов во время и после проведения терапии

В чем отличие цитологии от гистологического исследования?

Отличие цитологического исследования от гистологического, в первую очередь, заключается в том, что изучаются именно клетки, а не срезы тканей. Для гистологического исследования требуется либо операционный материал, либо забор материала методом трепан-биопсии. Для цитологического же исследования достаточно мазка со слизистой оболочки, соскоба с поверхности опухоли или материала, полученного тонкой иглой.

Подготовка гистологического препарата требует больше усилий и времени, нежели подготовка для цитологического анализа.

Как выполняется цитологическое исследование?

Для анализа используют различный биоматериал.

Эксфолиативный материал, то есть полученный методом «слущивания»:

соскобы с поверхности эрозий, ран, язв;
соскобы с шейки матки и цервикального канала, аспираты из полости матки;
секреты желез, экскреты, мокрота, транссудаты, экссудаты, промывные воды и т.д.
Исследование мочи на атипические клетки

Пункционный материал:

пунктаты, полученные тонкой иглой (тонкоигольная биопсия)
отпечатки материала трепан-биопсий из опухолей и различных новообразований

Операционный материал:

мазки-отпечатки и соскобы с удаленной ткани, жидкость, смывы и др. материал, полученный при проведении хирургических вмешательств.

Эндоскопический материал:

материал, полученный при проведении эндоскопического исследования

Цитологическое исследование — наиболее щадящий метод диагностики. Обычно забор материала для анализа протекает безболезненно, в амбулаторных условиях, без травматического воздействия на органы и ткани.

Взятый для анализа клеточный материал в цитологической лаборатории переносят на предметные стекла, окрашивают и исследуют под микроскопом.

Цитоморфолог использует в своей работе совокупность признаков атипии клетки, критически оценивая их наличие и степень выраженности. Результат анализа напрямую зависит от профессионализма специалиста, проводящего исследование: как в части подготовки материала, так и в части его исследования под микроскопом.

На поверхности опухолевых клеток есть особые белки – антигены. Причем, каждая опухоль экспрессирует свой собственный набор антигенов. При необходимости с помощью специальных реактивов для иммуноцитохимического исследования врач-цитолог может не только установить наличие злокачественно трансформированных клеток в исследуемом образце, но и определить гистотип опухоли, ее органную принадлежность, факторы прогноза и чувствительность к лечению.

Достоинства цитологического метода:

абсолютная безвредность для пациента
безболезненность
возможность применения многократных цитологических исследований
быстрота
диагностика злокачественных опухолей любой локализации и в любой стадии процесса.

Обычно для проведения исследования требуется несколько часов. Интраоперационное цитологическое исследование может быть выполнено в течение 10 минут.

За счет его безвредности, цитологический метод незаменим для оценки динамики морфологических изменений в клетках опухоли во время лечения, для определения терапевтического эффекта проводимого лечения. Для таких пациентов он имеет несомненные преимущества перед другими, более инвазивными методами исследования.

Методы цитологических исследований постоянно совершенствуются. Развитие эндоскопической техники позволяет целенаправленно получать материал для исследования из внутренних органов, ранее недоступных для морфологического анализа без оперативного вмешательства.

Таким образом, цитологическое исследование, благодаря сочетанию высокой информативности, безвредности для пациента и скорости проведения, при отсутствии травматизации тканей, имеет огромное значение в онкологии.

Авторская публикация:
Михетько Андрей Александрович
заведующий лабораторией цитологии НМИЦ онкологии им.Н.Н. Петрова,
врач клинической лабораторной диагностики (цитолог) высшей квалификационной категории, кандидат медицинских наук.

Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.

О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.

Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?

Кусочек ткани пациента: кожи, слизистых оболочек, внутренних органов, костей, головного и спинного мозга и т.п., так называемый биоптат.

Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.

Пункционная биопсия – «тычок», тонкой или толстой иглой. Пункционные биоптаты редко имеют диаметр больше 1-2 мм.
Ножевая биопсия – открытая или эндоскопическая (малоинвазивная), в том числе лапароторако-медиастиноскопия.

Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.

Операционный материал – это все что удалено во время операции, как правило, орган или его часть, или несколько органов и/или их частей с образованием (опухолью) или без него.

Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?

1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.

Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.

Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.

Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.

2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.

В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).

Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.

Процесс получения парафиновых блоков.

3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.

4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.

Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.

Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).

Для чего делаются срезы?

Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.

Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.

Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.

Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).

Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?

Гистологическое исследование
Иммуногистохимия (ИГХ)
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH), может быть хромофобной (принцип тот же, другой тип метки)

Что позволяют определить разные виды гистологических исследований

Гистологическое исследование – что это такое?

Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).

Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):

воспаление,
специфическое воспаление,
аномалия развития,
опухоль.

Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.

Окрашенные срезы под микроскопом

Инвазивный протоковый рак er 100%.

Карцинома сигмовидной кишки.

Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.

МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.

Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.

Низкодифферинцированный рак пищевода.

При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.

Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.

Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.

Иммуногистохимия (ИГХ)

Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.

Один из этапов ИГХ

ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.

При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).

Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.

Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.

Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.

Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.

Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.

В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.

Что определяется с помощью ИГХ?

Наличие рецепторов гормонов прогестерона и эстрогена при раке молочной железы;
Экспрессию HER-2/neu в клетках при раке молочной железы, раке желудка;
Определить ходжкинские и неходжкинские лимфомы — установить точный диагноз лимфомы на сегодняшний день невозможно без применения этого вида исследования.
Определить первичная это опухоль или метастазы, тканевую принадлежность метастазов.

Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)

Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.

FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.

В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.

Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.

Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.

Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.

Что определяется с помощью FISH-теста?

FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.

определяется наличие амплификации HER2 в случаях пограничного результата по данным ИГХ, что необходимо для назначения таргетной терапии;
проводится диагностика, то есть выявление генетических перестроек специфичных для определенного типа опухолей, когда невозможно окончательно установить диагноз при помощи более простых методик, чаще всего это саркомы мягких тканей и опухоли головного мозга;
генетические отклонения, вызывающие рак того или иного органа;
при лимфомах эта методика используется в диагностических целях и для выявления факторов неблагоприятного прогноза, то есть показаний для ранней интенсификации лечения.

Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.

За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.

Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.

Помните! Гистологические исследования – это отправная точка, от того насколько грамотно они выполнены зависит точность поставленного диагноза и эффективность назначенного лечения.

Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:

Качества стекол и блоков;
Комплектности предоставления стекол (необходимо предоставить все стекла и блоки);
Предоставление пациентом дополнительной информации, которая поможет верно интерпретировать данные гистологического исследования, ИГХ и FISH-теста, а именно: данные анамнеза заболевания, данные о сопутствующих заболеваниях, в первую очередь инфекционных (ВИЧ, гепатиты); все данные всех проведенных обследований и вмешательств: снимки — рентген, КТ, МРТ, УЗИ, протоколы операций, выписки.

После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.

Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?

Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):

Макроскопическое описание

Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.

Микроскопическое описание

Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».

Результаты иммуногистохимического исследования

В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.

Патологоанатомическое заключение

Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:

Это первичная опухоль или метастаз?
Где локализован первичный опухолевый очаг?
Каков гистологический тип опухоли (из клеток какого типа она состоит).

Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.

Дополнительные замечания и рекомендации

Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.

Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.

Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!

Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук

Гистологическое исследование, по сути, является методом диагностики заболевания на тканевом уровне — исследование врачом-патологоанатомом под микроскопом специально подготовленного участка патологической ткани позволяет получить представление о сути и выраженности патологического процесса, выявить его особенности и благодаря этому точно поставить диагноз и подобрать требуемое лечение. В онкологии гистологическое исследование играет роль «третейского судьи» — только заключение патологоанатома о наличии патологических клеток даёт право клиницисту поставить диагноз «рак». Гистологическое исследование широко применяется практически во всех медицинских специальностях и всегда выполняется после любой операции, но именно в онкологии оно имеет особое значение.

Как получают материал для гистологического исследования?

Процесс получения фрагмента ткани для гистологического исследования называется биопсия. Выделяют следующие виды биопсии:

Кор-биопсия. Выполняется специальной иглой и автоматическим биопсийным пистолетом.
Аспирационная биопсия. Применяется для забора жидкостного содержимого образований, например, кист или плевральной полости.
Тонкоигольная аспирационная биопсия. Подвид аспирационной биопсии, материал забирается с помощью шприца и специальной иглы с заостренным или фестончатым краем. При таком методе возможно получить для исследования не только жидкостное содержимое, но и кусочек ткани.
Аспирационно-режущая биопсия. При этом методе одной иглой берутся и фрагменты ткани, и клеточный материал для исследования.
Трепанбиопсия. Забор производится трепаном — инструментом, представляющим собой полую трубку с заострённым концом. Применяется для взятия биопсии из костной ткани.
Эксцизионная биопсия. Подразумевает удаление всего патологического образования (например, опухолевого узла) целиком. Наглядным примером эксцизионной биопсии является удаление увеличенного лимфатического узла при подозрении на лимфому.
Скарификационная биопсия. Забор выполняется путём срезания тонкого пласта ткани, широко применяется для исследования новообразований кожи.
Щипковая биопсия. Выполняется специальными биопсийными щипцами, часто применяется при заболеваниях желудочно-кишечного тракта.
Браш-биопсия. Материал для исследования забирается с помощью специальной щёточки путём его соскабливания — например, со стенки бронха.
Петлевая биопсия. Забор гистологического материала производится петлей одновременно с работой коагулятора. Применяется в отоларингологии, гинекологии.
Отпечаток. Применяется при необходимости исследования отделяемого из эрозии или язвы — предметное стекло прикладывается к изъязвленной поверхности.
Мазок-отпечаток. Материал для исследования снимается скальпелем, шпателем или специальной щёточкой и переносится на предметное стекло.

Как выполняется биопсия?

Биопсия проводится обычно под местной анестезией, в случае, если образование располагается достаточно глубоко — под контролем УЗИ или рентгена. От пациента не требуется какой-либо специфической подготовки (кроме, пожалуй, психологического настроя). Время процедуры не ограничено — если выполняется скарификационная биопсия или мазок-отпечаток, то требуется буквально несколько минут, а если речь идёт о биопсии глубоко расположенного образования, особенно вблизи крупных сосудов или нервов, то времени требуется значительно дольше.

В процессе выполнения биопсии иглу проводят к образованию и, в зависимости от выбранного метода, либо выполняют аспирацию одновременно с продвижением иглы к центру образования (если проводится аспирационная биопсия), либо вводят иглу в образование и фиксируют внутри неё столбик ткани (если проводится кор-биопсия).

Процесс получения ткани с помощью биопсийной игры на сегодняшний день является либо полуавтоматическим, либо автоматическим. При полуавтоматическом процессе продвижение желобка с иглой в патологический очаг производится вручную, а активизация канюли в игле, которая и захватывает ткань, происходит автоматически с помощью подпружиненного спускового механизма. В автоматическом варианте используется специальный биопсийный пистолет, и врачу требуется только поднести его к интересующей области.

Также возможно провести биопсию во время выполнения диагностического эндоскопического исследования, например, ЭГДС или бронхоскопии. В этом случае забор гистологического материала происходит практически безболезненно для пациента, хоть и причиняет определённый дискомфорт.

Кроме того, на гистологическое исследование будут направлены ткани, удалённые во время операции. Следует отметить, что в отдельных случаях операция может быть назначена как раз для получения гистологического материала (например, назначение раздельного диагностического выскабливания матки и цервикального канала с целью установить причину гинекологического заболевания).

Виды гистологического исследования

В первую очередь проводится собственно гистологическое исследование, то есть изучение специально подготовленной ткани, взятой при биопсии, под микроскопом. Процесс подготовки ткани для исследования включает несколько этапов.

Кусочек ткани обезвоживают и пропитывают парафином, тем самым формируя небольшой кубик, в который и заключена ткань.
Далее с парафинового кубика выполняют срезы микротомом, причём толщина срезов может достигать 3 микрометров.
Срезы переносятся на стекло, подготавливаются к окрашиванию и окрашиваются одним из известных методов с целью облегчения определения и дифференцировки отдельных структур ткани при проведении исследования.

Таким образом, процесс подготовки ткани к гистологическому исследованию достаточно длительный, чем и объясняется получение заключения врача через несколько дней после биопсии. Однако в случае, когда требуется срочное исследование (например, оценка краёв резекции в ходе операции или же исследование сторожевого лимфоузла при раке молочной железы), процесс подготовки ткани может быть сокращён до получаса, однако в этом случае качество полученного гистологического препарата существенно ниже, поэтому после операции проводится тщательное изучение биоматериала в плановом порядке.

Описание процесса подготовки ткани к гистологическому исследованию неслучайно описано столь подробно, поскольку нередки ситуации, когда пациент хочет получить второе мнение или же продолжить лечение в другом учреждении. В этой ситуации целесообразно взять и готовые гистологические препараты («стёкла»), и, по возможности, парафиновые блоки, так как проводящий исследование патологоанатом может при необходимости дорезать несколько срезов с блока, применить иной вид гистологических красителей и провести дополнительные исследования на большем количестве биопсийного материала.

Какие исследования могут дополнять изучение срезов под микроскопом? В первую очередь это иммуногистохимическое исследование, позволяющее определить гистологическую принадлежность опухоли, что крайне важно, например, при исследовании метастаза из невыявленного первичного очага. В этом случае оценивается экспрессия различных генов и их белков в ткани. Также при раке молочной железы иммуногистохимическое исследование позволяет определить, есть ли у опухоли рецепторы к эстрогену и прогестерону, и, соответственно, назначить требуемое при выявленном молекулярном подтипе химиотерапевтическое лечение и гормонотерапию. Наконец, определение экспрессии белка Her2/neu позволяет заключить, показана ли больному раком молочной железы или раком желудка таргетная терапия.

Отдельно хотелось бы остановиться на цитологическом исследовании. В отличие от гистологического исследования, при котором предметом изучения являются ткани, при цитологическом анализе изучаются отдельные клетки на предмет патологических отклонений. Цитологическое исследование обладает меньшей точностью, нежели гистологическое, но позволяет дать заключение о природе заболевания в тех случаях, когда невозможно получить кусочек ткани (например, при анализе плеврального выпота — является ли он связанным с опухолевым поражением плевры или нет — или смывов с брюшины в случае подозрения на метастатические отсевы рака яичников).

Показания для проведения гистологического исследования

Гистологическое исследование — наиболее точный метод диагностики, к которому следует прибегать, когда все другие исследования в совокупности не могут однозначно указать на конкретный диагноз.

В первую очередь выполнение гистологического исследования показано пациентам с подозрением на злокачественное новообразование или с уже подтвержденным диагнозом «рак». В первом случае результат исследования даёт право врачу окончательно поставить диагноз. Во втором случае выполнение гистологического исследования показано, чтобы:

отслеживать динамику, например, подтвердить отдаленное метастазирование;
менять тактику лечения сообразно результатам, например, если больной раком молочной железы химиотерапия проводилась до операции, а результаты послеоперационного гистологического исследования не показали полного ответа опухолевых клеток на лечение, в отдельных случаях возможно назначить таблетированную химиотерапию в послеоперационном периоде.

Далее, гистологическое исследование показано в случае заболеваний, которые по своей сути являются доброкачественными, но обладают потенциалом к озлокачествлению. Таковыми являются, например, полипы кишечника; сами по себе они не несут угрозы для жизни, но потенциально могут переродиться в опухоль, поэтому полипы после удаления обязательно подлежат исследованию с целью определить, не появились ли в них опухолевые структуры.

Широкое применение гистологического исследования наблюдается и при неопухолевых заболеваниях. В гастроэнтерологии и гинекологии исследование тканей и клеток, помимо исключения опухолевого процесса, также предназначено для оценки воспалительных процессов и их динамики, выявления эндокринных нарушений. Большую роль гистологическое исследование имеет и при лечении аутоиммунных заболеваний, позволяя оценить степень активности патологического процесса и тяжесть поражения, а также ответ на проводимую терапию.

Наконец, гистологическое исследование, а, вернее, его подвид — цитологическое исследование — нашло своё место и в скрининге. Исследование мазка-отпечатка с шейки матки позволяет определить предраковое состояние или уже развивающуюся опухоль, и простота и эффективность данного метода позволила включить мазок в скрининг на рак шейки матки.

Следует отметить, что противопоказаний как таковых к проведению гистологического исследования нет, так как забор гистологического материала является малоинвазивной и хорошо переносимой процедурой. Возможные осложнения могут быть связаны с индивидуальной реакцией пациента на анестетики или же с нарушением свёртываемости крови. В любом случае пациенту назначается покой и холод на место проведения биопсии, анальгетики при болях.

Результат гистологического исследования

Результат гистологического исследования будет готов спустя несколько дней после выполнения биопсии, что связано с этапной подготовкой исследуемой ткани и изучением биоматериала врачом-патологоанатомом под микроскопом. Результатом может быть как короткое заключение с указанием установленного тканевого строения патологического образования (например, «инвазивный дольковый рак»), так и подробное описание всех изменений в строении ткани и составляющих её клеток.

Расшифровкой результатов гистологии должен заниматься лечащий врач, так как гистологическое исследование назначается именно им и с совершенно определенной целью. Полученное заключение по цитологическому или гистологическому исследованию поможет врачу в установке клинического диагноза и в подборе требуемых на данный момент методов лечения.

Гистологическое исследование является одним из методов диагностики злокачественных новообразований и ряда доброкачественных заболеваний. Врачи «Евроонко» обладают высочайшей квалификацией для интерпретации результатов исследования и назначения требуемого лечения.

Читайте также: